Біосинтез в рослинах рекомбінантного коліцину М та його антибактеріальна активність

Abstract

Магістерська кваліфікаційна робота «Біосинтез в рослинах рекомбінантного коліцину М та його антибактеріальна активність» виконана у навчально-науковій лабораторії відділу генетичної інженерії Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України та представлена в обсязі 71 сторінок формату А4, містить 6 таблиць, 24 рисунків, 97 використаних джерел, і складається з таких розділів: – Вступ – Огляд літератури – Матеріали і методи – Результати та їх обговорення – Висновки – Список використаних джерел Актуальність теми: в зв’язку з кризою стійкості до антибіотиків, необхідно знаходити нові методи лікування та профілактики супербактерій та бактерій з мультирезистентністю. Для запобігання спалахам кишкових інфекцій в харчовій промисловості активно застосовують антибіотики для боротьби з такими патогенами, як Campmylobacter spp, Escherihia coli та Salmonella spp. Новим методом терапії може стати застосування коліцину М, це антибактеріальний пептид, який в природі продукується кишковою паличкою з вузькоспеціалізованим спектром дії. Ця сполука ефективно елімінує інші штами E. coli. Крім того, дану сполуку можна отримувати в рослинних системах експресії, вже опубліковані дослідження, в яких за допомогою генетичної інженерії модифікували томати та тютюн. Важливо зазначити, що Управління з продовольства і медикаментів США перевірили вплив на людський та тваринний організм і не виявило шкідливого впливу, таким чином коліцини повністю безпечні для вживання В кваліфікаційній роботі досліджено можливість конститутивного біосинтезу коліцину М модифікованих рослинах, таких як Lactuca sativa та Brassica rapa var. Niposinica. Ці рослини потенційно можна буде вживати в сирому вигляді або додавати до раціону тварин, тим самим запобігати інфекціям та епідеміям. В світовій практиці обмаль подібних досліджень, що робить тему роботи актуальною . Мета роботи: отримати генетично трансформовані за допомогою вектору рСВ052 лінії Lactuca sativa та Brassica rapa var. Niposinica, котрі через біосинтез рекомбінантного коліцину М проявляють антибактеріальну активність. Об’єкт дослідження: трансформовані Lactuca sativa та Brassica rapa var. Niposinica , що синтезують рекомбінантний білок коліцин М Предмет дослідження: Lactuca sativa сорту «Одеський кучерявий», Brassica rapa var. Niposinica сорту «Високоврожайний», вектор pСВ052, Agrobacterium tumifaciens штаму AGL1, Escherichia coli штаму DH5a. Методи дослідження: методи культивування in vitro, спектрофлуориметричний метод, молекулярно-генетичні методи (ПЛР, електрофорез), метод Кірбі-Бауера, спот-тест.